Кишечная палочка аэроб, способна утилизировать сложные органические соединения, хорошо растет на всех питательных средах, при слабощелочной реакции и оптимальной температуре 37°. Рост и размножение бактерий возможны при довольно значительных колебаниях как рН среды, так и температурного режима. На плотных средах формируются плосковыпуклые колонии диаметром от 2 до 3 мм, с ровными краями, опалово мутноватого цвета, сочные, с блестящей поверхностью. На бульоне и других жидких питательных средах кишечная палочка растет, образуя равномерную муть и небольшой осадок. На средах Гисса, содержащих различные углеводы, кишечная палочка образует кислоту и газ, на среде Эндо дает рост колоний, окрашенных в цвет фуксина, с металлическим блеском. Имеются мутанты кишечной палочки, получившие название Е. coli mutabile, которые не разлагают лактозы. На среде Эндо они образуют неокрашенные колонии.