Микробиология, физиология человека, медицинская микробиология

Апрель 2011

Реакция может быть поставлена не только с микроорганизмами, но и с любым белком небактериального происхождения. Она применяется для диагностики и изучения самых различных заболеваний туберкулеза, менингита, гонореи, лепры, риккетсиозных и вирусных заболеваний. Под названием реакции Вассермана (по имени автора, детально разработавшего ее принцип и методику) реакция связывания комплемента нашла широкое применение для диагностики сифилиса. Особенностью реакции Вассермана является то, что в качестве антигена для ее постановки берется не возбудитель сифилиса, а липоидные экстракты из печени сифилитического плода или из сердца быка. Существуют различные модификации реакции связывания комплемента, что затрудняет использование их в практической диагностической работе, но они широко применяются в экспериментальных исследованиях из за высокой чувствительности.

Реакция связывания комплемента. Среди различных серологических реакций иммунитета, применяемых для определения природы и количества антител и антигенов, реакция связывания комплемента характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью. Реакция разработана на принципе Борде и Жангу, которые в 1901 г. установили, что при взаимодействии антитела со специфическим для него антигеном происходит процесс адсорбции комплемента на образовавшемся комплексе антиген + антитело. Этот процесс не проявляется визуально. Для выявления адсорбции комплемента к смеси, состоящей из антигена, антитела и комплемента, добавляется гемолитическая система, состоящая из гемолитической сыворотки и эритроцитов барана. Если взятые для исследования антиген и антитело специфичны и происходит полная адсорбция комплемента, гемолиз не происходит. На дне пробирки после инкубации в течение 30 60 минут при 37° и последующем выдерживании смеси в течение 20 24 часов при комнатной температуре образуется осадок негемолизированных эритроцитов. Если же антиген и антитело неспецифичны и не образуют комплекса, адсорбирующего комплемент, последний остается в свободном состоянии и адсорбируется на гемолитической системе, вследствие чего наступает гемолиз эритроцитов. Исследуемая смесь приобретает красный лаковый цвет. Реакция связывания комплемента, как и другие реакции иммунитета, протекает при строгих количественных соотношениях взятых в опыт ингредиентов и точно оттитрованных количествах комплемента, гемолитической сыворотки, антигена и антител.

В практике эта реакция применяется редко, главным образом для дифференциации холеры и холероподобных вибрионов. Чаще реакция бактериолиза используется в исследовательской работе для изучения динамики образования антител.
Реакция гемолиза. При гемолизе эритроцитов под влиянием антител и комплемента мутная взвесь вследствие выхода из эритроцитов гемоглобина превращается в ярко красную прозрачную жидкость так называемую лаковую кровь. Реакция широко применяется в лабораторной практике в качестве показателя адсорбции комплемента при диагностических реакциях, получивших название реакций связывания комплемента (PGK). Для реакции гемолиза обычно пользуются эритроцитами барана и гемолитической сывороткой, полученной при иммунизации кроликов тем же антигеном.

В опытах in vitro реакция ставится по следующей методике. Специально полученную иммунную сыворотку или сыворотку больного смешивают в пробирке с исследуемым микробом. К смеси прибавляют комплемент и выдерживают ее в термостате 1 2 часа. Затем из смеси делают высев на чашку Петри. В качестве контроля берут нормальную сыворотку, к которой прибавляют те же ингредиенты. Через сутки подсчитывают число выросших колоний на опытной и контрольной чашках. Если испытуемый микроб и иммунная сыворотка специфичны, т. е. если произошел лизис бактерий, то на опытной чашке вырастает значительно меньше колоний, чем в контроле.

Реакция бактериолиза. Происходит как в организме животных, так и в опытах in vitro. Применяется для определения антител с помощью известного микроба и для определения вида микробов с помощью заранее приготовленной иммунной сыворотки. Реакция бактериолиза, известная под названием реакции Исаева Прейфера, предложенная для определения вида холерного вибриона, ставилась по следующей методике. Морскую свинку иммунизируют холерным вибрионом, затем ей внутрибрюшинно вводят исследуемый микроб. Через 10 20 60 минут из экссудата брюшной полости делают мазки и микроскоиируют. Если наблюдается лизис бактерий, это значит, что исследуемый микроб является холерным вибрионом. Но реакция может ставиться и несколько по иному. В пробирке смешивают иммунную сыворотку с исследуемым микробом, эту смесь вводят в брюшную полость нормальной морской свинки, а затем исследование ведут, как и в первом случае.